Vurdering av funksjonell tilstand for øyets lakrimale apparater

Kategori: Sykepleie i oftalmologi / Metoder for forskning av synsorganet

Det lakrimale apparatet inkluderer lakrimalkjertelen og tårekanalene. Den lakrimale kjertelen ligger i den øvre ytre delen av bane. Lacrimal væske fra kjertelen kommer inn i øvre bue av bindehinnen (under øvre øyelokk ved det ytre hjørne av øyet) og vasker hele frontflaten på øyeeplet, og dekker hornhinnen fra å tørke ut.

  1. Vestfarge tåre-nesetest - lar deg bestemme funksjonstilstanden til tårekanalene, med utgangspunkt i lacrimalåpningene. En 2% fluoresceinløsning blir innpodet i øyet og pasientens hode vippes ned. Hvis malingen har blitt påført innen 5 minutter, er prøven positiv (+); bremset ned - 6-15 minutter; mangel på maling i nesegangen - test (-).
  2. Bestemmelse av indikatorene for total tåreproduksjon - Schirmers test - utføres ved hjelp av en stripe gradert filterpapir brettet i en vinkel på 45 °, som plasseres bak det nedre øyelokket til bunnen av den nedre buen på bindehinnen. Øynene er lukket. Etter 5 minutter måles fuktlengden. Normalt er den 15 mm.
  3. Norn-test - lar deg bestemme stabiliteten til hornhinnefilmen. Etter rensing av konjunktivalsekken fra slim og pus, blir 1-2 dråper av en 2% løsning av kollargol innpodet to ganger med et intervall på 0,5 minutter. Testen anses som positiv hvis kollargolen i løpet av 2 minutter absorberes fullstendig, og når den trykkes på området av lacrimal-sekken, vil det komme en dråpe fra lacrimal-åpningen. Hvis collargol ikke skiller seg ut fra lakrimalåpningene, anses testen som negativ.
  4. Samtidig sjekkes en nasal collargol-test. For å gjøre dette, settes en bomullspinne under den nedre nese conch til en dybde på 4 cm. Når flekker etter 2-3 minutter farges, anses prøven som positiv, etter 10 minutter - forsinket og i fravær av farge - negativ.
  5. Irrigasjon av lacrimalkanalene - utføres etter konjunktival anestesi ved tre ganger installasjon av 0,25% dicainløsning. En konisk Siegel-sonde introduseres i den nedre lacrimalåpningen, først vertikalt og deretter horisontalt langs lacrimal canaliculi opp til nesebeinet. Deretter introduseres en fysiologisk eller desinfiserende løsning med en sprøyte med en stump nål eller med en spesiell kanyle på samme måte. Pasientens hode vippes ned, og i normal tilstand av lakrimalgangene strømmer væske ut av nesen med en strøm. I tilfeller av innsnevring av lacrimal-nasal kanalen strømmer væsken ut i dråper, og i tilfelle hindring av lacrimal kanalene strømmer den ut gjennom den øvre lacrimal åpning.
  6. Undersøkelse av lakrimalkanalene - utføres etter utvidelse av den nedre lakrimale åpningen og tubulien med Siegel-sonden. Langs denne banen blir en Bauman-sonde nr. 3 utført til nesebeinet, hvoretter sonden dreies loddrett og fester seg til beinet, passerer gjennom lacrimal-sekken inn i lacrimal-nasal kanalen. Lyding brukes til å lokalisere strikturer og utvide nasolakrimale kanal.
  7. For å diagnostisere endringer i lacrimalkanalene er det bedre å bruke radiografi. Etter anestesi med dikain av konjunktivalsekken og utvidelse av rivepunktet og tubulien med en konisk sonde, injiseres 0,4 ml av en emulsjon av vismutnitrat i vaselinolje i lacrimalkanalene. Deretter tar du et bilde ved å legge pasienten i hake-nese-stillingen. I dette tilfellet blir brudd på den normale strukturen i lakrimale passasjer lett oppdaget. Etter radiografi vaskes de lakrimale passasjene med saltvann for å fjerne emulsjonen..
  1. Oftalmologi: lærebok / Ed. E. I. Sidorenko. - 2. utg., Rev. - M.: GEOTAR-Media, 2009.
  2. Ruban E.D., Gainutdinov I.K. Sykepleie i oftalmologi. - Rostov n / a: Phoenix, 2008.

Formulering av reaksjonen mellom nøytralisering og fargetest

PH: basert på nøytralisering av virusens smittsomme aktivitet ved binding til spesifikke antivirale antistoffer. PH brukes til å identifisere isolerte viruser, dvs. for å bestemme arten og virustypen.

Uttalelse: pH er reprodusert i virussensitive levende systemer.

Seriefortynninger tilberedes fra det virusholdige materialet, og spesifikt serum tilsettes dem ved en fortynning i samsvar med titeren som er angitt på ampulletiketten. Virusserumblandingene inkuberes i 30-60 minutter. på 37 gr. For å sikre binding av antigener til antistoffer. Deretter er blandingen infisert med vevskultur, kyllingembryoer, laboratoriedyr. Kontrollen er det følsomme systemet for serumfrie virusinfiserte individer..

Regnskap. Positivt resultat: nøytralisering av CPD (fravær av degenerative forandringer) i cellekultur, patologiske forandringer i kyllingembryoer eller dyr. Negativt resultat: tilstedeværelsen av en CPD, derfor har ikke viruset blitt nøytralisert.

Nøytraliseringsindeksen er forholdet mellom titer av viruset i kontrollen og titer av viruset i eksperimentet. Hvis ID-en er mindre enn 10 - er reaksjonen negativ, fra 11-49 - tvilsom, over 50 - positiv.

Variant PH - undertrykkelse av dannelse av virusplakk under virkningen av virusspesifikt antiserum. Staging. Et antiserum tilsettes det virusholdige materialet. Inkubasjon 30-60 minutter Blandingen blir deretter påført et monolag av sensitive cellekulturer. Dekk deretter til med et tynt lag agar. Etter inkubering av avlingene i 24 timer på overflaten av agaren, vises opplyste områder med en viss form (plakk), som er områder med døde celler i et kontinuerlig monolag av cellekultur. Virustiteren etablert ved denne metoden uttrykkes som antall plakkdannende enheter (PFU) i 1 ml.

Fargetest - versjon av pH. Som et resultat av den vitale aktiviteten til celler akkumuleres sure produkter i næringsmediet. Som et resultat blir fargen på indikatoren (fenolrød) i mediet oransje. Når en cellekultur er infisert med cytopatogene virus, undertrykkes cellemetabolismen, pH i mediet og fargen endres ikke, den forblir rød.

Staging. 0,25 ml av arbeidsfortynningen av viruset og den tilsvarende fortynningen av serum blir tilsatt til rørene. Blandingen holdes ved romtemperatur i 30-60 minutter, 0,25 ml cellesuspensjon tilsettes rørene, og rørene lukkes med stoppere. Termostat 6-8 dager ved 37 gr. Regnskap for pH 7,4 og høyere - reproduksjon av viruset, 7,2 og lavere - nøytralisering med antistoffer.

Fargesikker test
læremiddel

Fargesikker test

Nedlasting:

VedleggetStørrelsen
43_sqb.pdf2,66 MB

Preview:

Hvis du vil bruke forhåndsvisningen, lager du deg en Google-konto (konto) og logger deg på den: https://accounts.google.com

Om emnet: metodologisk utvikling, presentasjoner og sammendrag

Barn elsker å oppfinne, fantasere, komponere. I lesetimen fikk oppgaven å komme med noen linjer om høsten - en selvmotsigende tid på året, fordi noen elsker høsten, for dets lysstyrke, tror andre.

Ekstrafaglig begivenhet dedikert til Seiersdagen.

Læring ved å utvikle kreative evner i moderne pedagogisk praksis anses som en av de effektive måtene å kjenne verden rundt et barn på.

Studie av graden av konsentrasjon og stabilitet av oppmerksomhet.

Et møte med foreldre til fremtidige førsteklassinger.

Teknikken “Korrektiv test” (Bourdon Test) lar deg diagnostisere oppmerksomhetskonsentrasjon, oppmerksomhetsspenn, oppmerksomhetsomskiftbarhet.

En prøvetest er en interessant måte å finne ut hvor oppmerksomt barnet ditt er, en forskningsmetode som vurderer omstillbarhet, distribusjon, stabilitet og konsentrasjon..

Fargetest

Fraværet av den cytopatiske effekten av viruset. Noen virus (f.eks. Rubellavirus) har ikke en cytopatisk effekt. De kan oppdages ved interferens av et annet virus som kan forårsake degenerasjon av infiserte celler..

Fenomenet hemodisorpsjon av virus

Mange virusinfiserte celler tilegner seg muligheten til å absorbere forskjellige røde blodlegemer på overflaten. Fenomenet hemadsorpsjon har vanlige mekanismer med hemagglutinering og manifesterer seg i de tidlige stadier, før manifestasjonen av en cytopatisk effekt, i fravær eller svak alvorlighetsgrad.

Fargereaksjon

En indikator blir lagt til kulturmediet som brukes til å opprettholde cellene. Cellevekst ledsages av akkumulering av metabolitter, en endring i pH i mediet og en endring i fargen på indikatoren. Virusinfeksjon av kulturer hemmer skarpt cellemetabolismen, og mediet beholder sin opprinnelige farge.

Rask diagnose av virusinfeksjon

For rask identifisering av virusinfeksjoner er det utviklet mange raske diagnostiske metoder basert på påvisning av viral Ag. For for eksempel for tidlig diagnose av HIV-infeksjon blir ELISA mye brukt for å oppdage overflate-Ag-virus.

13) Essensen av hemadsorpsjonsreaksjonen

Hemadsorpsjon - adsorpsjon av røde blodlegemer på overflaten av virusinfiserte celler.

Teknikken til r-ii. 0,2 ml 0,4% erytrocytsuspensjon tilsettes til prøverør med en virusinfisert vevskultur. Rørene rystes og lar den vippe. Varigheten av erytrocyttkontakt med celler avhenger av inkubasjonstemperaturen og virustypen. Reaksjonen registreres under en liten forstørrelse av mikroskopet etter kort risting av rørene for å skille ikke-adsorberte røde blodlegemer fra celleoverflaten. Ved viral hemadsorpsjon festes røde blodceller godt på cellene og blir liggende på dem etter 1-2 ganger vask. Røde blodlegemer adsorberer på overflaten av virusinfiserte celler..

14) Essensen av metoden for fargeprøver

Grunnlaget for r-ii er det faktum at sure metabolske produkter akkumuleres i prosessen med celleproduksjon og vekst i næringsmediet, noe som reduserer pH i mediet. I vev som er infisert med viruset, settes celledegenerasjonen inn og hemmer dermed metabolismen deres, og det er ingen endring i pH. For å oppdage disse endringene tilsettes fenolrød indikator til grovmediet. Ved pH over 7 er indikatoren rød, ved pH 7 er den oransje og ved pH under 7 er den gul. Hvis cellene ikke er infisert med viruset (eller det nøytraliseres med et spesifikt serum), skifter pH i pitmediet til syresiden, og det blir gult. Hvis viruset multipliserer seg, degenererer cellene og mediet beholder sin opprinnelige røde farge. Fargesonde-metoden kan brukes til å titrere viruset eller nøytralisere antistoffer

15) Essensen av plakkmetoden.

Dulbecco er foreslått for å oppnå isolerte viruskolonier. Det er basert på utseendet til et monolag av virusinfiserte celler fra blekede områder som består av degenererte celler. Disse områdene, kalt plakk, er kolonier av et virus dannet fra en enkelt viruspartikkel.Metoden består i å dyrke et monolag av celler på en vegg av en celle og deretter fjerne gropen. Onsdag. Celler er infisert med et virus og helles med agar som inneholder en nøytral rød indikator. Når celleveksten oppstår, vil mediet endre seg til en sur side, og indikatoren blir rosa. I de områdene der cellene døde under påvirkning av viruset, endrer pH i mediet og derfor ikke fargen på indikatoren. Slike øyer med ikke-farget medium ser ut som hvitaktige plaketter.

16) Essensen av r-og hegglutination for påvisning av virus.

Allantoic væske sjekkes for virusinnhold ved agglutinering av kyllingrøde blodlegemer på glass (og i rør - virustitrering). For produksjon av p-ia på glass tilsettes en dråpe av en 5% suspensjon av røde blodlegemer til en dråpe virusholdig materiale. Reaksjonen finner sted i løpet av 5 minutter..

Hemagglutinasjonsinhibisjonsreaksjonen (RGTA) kan brukes til å bestemme virustypen eller typen og titeren på antistoffer. For å bestemme typen virus påføres en dråpe virusholdig materiale på en glassglide (antall dråper skal tilsvare antall sera). En dråpe typisk serum tilsettes de tilberedte dråpene i rekkefølge. Den fysiologiske løsningen og serumet er kontrollen. I hver dråpe tilsettes deretter en dråpe av en 5% suspensjon av røde blodlegemer. Resultatet blir registrert etter 5 minutter. Hvis viruset samsvarer med serumtypen, binder antistoffene hemagglutin av viruset og hemagglutinering forekommer ikke (RGTA-positiv). Denne reaksjonen kan også utføres i prøverør for å titrere viruset eller antistoffene (antihemagglutiner)

Binokulær synstest

Evnen til en person til å oppfatte omgivende gjenstander med to øyne på en gang kalles kikkertvision. Det lar deg se objekter tredimensjonalt og evaluere deres romlige posisjon. Binokulært syn er normen, og spesielle tester hjelper til med å identifisere lidelser.

I denne artikkelen

Hva er forskjellen mellom kikkert, monokulær og samtidig syn?

Binokulært eller stereoskopisk syn innebærer to øyne evne til å oppfatte visuell informasjon samtidig og overføre den til hjernebarken, som kombinerer to bilder til et enkelt bilde. Slik visjon hjelper ikke bare til å evaluere de omkringliggende objektene etter form og størrelse, men lar deg også tydelig oppfatte dybden, lettelsen, volumetriske egenskapene til objektet, avstanden til den, posisjonen i rommet. Binokularitet er også en viktig betingelse for god synsskarphet og brede synsfelt..


Hvis bare ett øye av en eller annen grunn er involvert i den visuelle prosessen, eller funksjonen til synsorganene ikke er koordinert, snakker de om binokulær synshemming.
Det er to hovedtyper av syn med kikkertforstyrrelser - monokulær og samtidig.
Monokularitet er preget av det faktum at alle objekter som faller inn i synsfeltet til en person blir oppfattet av bare ett øye. Dette fører til en betydelig innsnevring av synsfeltet, redusert synsskarphet. En person med monokulært syn kan sette pris på formen og størrelsen på objektene han ser på, men mulighetene for dyp oppfatning av objekter hos slike mennesker er begrensede. Ifølge eksperter reduserer monokulært syn nøyaktigheten av romlig dybdeanalyse med omtrent 20 ganger.

En person med monokulært syn kan tilpasse seg det vanlige livet, men i mange yrker som krever høy nøyaktighet av visuell persepsjon, kan manglende evne til å se med to øyne samtidig bli en hindring.
Samtidig visjon skilles også, noe som gjør at du kan se verden med to øyne, men på samme tid kobler ikke bilder mottatt fra forskjellige visuelle organer hjernen til et enkelt bilde.

Hva er en fargetest for studiet av kikkertvisen?

Det er forskjellige metoder for å studere kikkertvision, men en av de vanligste og nøyaktige er maskinvaremetoden - en fire-punkts fargetest. Det lar deg bestemme nøyaktig om synet ditt er kikkert, monokulært eller samtidig..


Denne studien kalles også Wors-testen på vegne av en engelsk øyelege som først foreslo å bruke den for å vurdere synets natur. Fargetesten er basert på prinsippet om separasjon av visuelle felt i to øyne ved hjelp av fargefiltre. Det hjelper med å bestemme arten av synet, det ledende øyet, vinkelen på strabismus og andre oftalmiske egenskaper.
På en klinikk brukes en spesiell enhet for å utføre en fargetest. For eksempel er CT-1-apparatet mye brukt i russiske medisinske institusjoner. Det er faktisk en stor rund lampe, som er lukket på den ene siden av et svart lokk. Enheten har fire runde hull: to av dem er lukket av grønne filtre, den ene rød og den andre hvit.

For å studere kikkertvisjon må pasienten bruke spesielle briller med grønne og røde filtre. Gjennom disse linsene vil han se med den ene øyesirklene bare i rød farge, og med den andre - bare grønn. Hvitfarge skal normalt oppfatte begge synsorganene. Lykten er plassert på veggen, og en person med brillefiltre ser på ham fra fem meters avstand.

Hvordan bestemmes kikkertvision ved bruk av en fargetest??

Før studien starter, bør legen sjekke kvaliteten på lysfiltrene. For dette dekker personen som testes vekselvis venstre og deretter høyre øyne med et spesielt skjold. I det første tilfellet ser han bare to røde sirkler, og i det andre tilfellet tre grønne sirkler. Disse testresultatene indikerer at fargetesten er normal, og at du kan begynne den grunnleggende studien av kikkertvisjonen.
Det utføres med to åpne øyne, som en person skal se på de runde hullene i apparatet. Avhengig av hvilket bilde han ser, tolker øyelegen testresultatene..

  • Fire sirkler - kikkertvisjon.

Hvis en person i løpet av en test ser fire sirkler, betyr dette alltid normalt kikkertvisjon. Imidlertid indikerer fargene de er malt i fravær eller tilstedeværelse av et ledende øye.
To røde og to grønne sirkler betyr at det ledende øyet er det rette.
Hvis en person ser en rød og tre grønne sirkler, er lederen venstre øye.
En hvit, en rød og to grønne sirkler indikerer at det ledende synsorganet er fraværende.

  • Fem sirkler - monokulært syn

Hvis en pasient undersøkte fem sirkler på enheten mens han undersøkte kikkertvisjonen, indikerer dette tydelig samtidig syn.
Hvis den venstre røde sirkelen er plassert til høyre for den midtre grønne, indikerer dette strabismus i en konvergerende type (når det skvisende øyet blir rettet mot nesen).
Hvis den venstre røde sirkelen er plassert til venstre for det midtre grønt, kan divergerende strabismus diagnostiseres (det skvisende øyet er rettet utover).
Hvis den venstre røde sirkelen er plassert under eller over gjennomsnittet grønt, er dette et tegn på vertikal strabismus.

  • Tre eller to sirkler - monokulært syn

En pasient som bare ser to røde eller tre grønne sirkler når han består fargetesten, får diagnosen monokulært syn på høyre eller venstre øye.

Er det mulig å undersøke barn i en fargetest?

Binokularitet i synet spiller en viktig rolle i utviklingen av et barn, derfor er det nødvendig å på kort tid bestemme mulige forstyrrelser i denne evnen. Samtidig bør foreldre vite at kikkertvisjonen går gjennom flere stadier av utvikling og til slutt bare dannes etter 12 år.

Fargetesten er egnet for studier av barns syn hvis barnet allerede vet hvordan det skal telle til fem, kjenner fargene og kan bestemme høyre og venstre side. I en alder av fem til seks år har de fleste barn allerede slike ferdigheter, slik at de kan bestå testen på en fargetest. I noen medisinske institusjoner for barn er det spesielle enheter der hullene ikke er runde i form, men er laget i form av stjerner, hester og andre figurer. Hvis det er vanskelig å bestemme binokulariteten i et barns øyne ved hjelp av en fargetest, kan en øyelege foreslå metoder for ikke-apparatsforskning.

Alternative metoder for å bestemme binokulært syn

Det er ikke alltid mulig å raskt få en avtale med en øyelege og gjennomgå en fire-punkts fargetest. I dette tilfellet kan du bruke enklere forskningsmetoder som vil bidra til å identifisere mulige kikkertforstyrrelser selv hjemme..

Sokolov-metoden er den mest kjente måten å teste kikkertvisjon på. Det er kjent som et "hull i håndflaten", og det krever ikke spesielle instrumenter eller sofistikert utstyr. Det er nok å ta et rør som er omtrent 30 cm langt (det kan bare være et krøllet papirark), feste det til det ene øyet og se på avstanden. Håndflaten skal bringes til kanten av røret, mens du lukker utsikten for det frie øye.

Hvis de visuelle organene dine fungerer sammen, få et bilde på samme tid, og hjernen fletter dem sammen til et enkelt bilde, vil du se at det har dannet seg et "hull" i håndflaten. Denne effekten oppstår på grunn av at bildene fra høyre og venstre øyne overlapper hverandre, og kobles sammen til et enkelt bilde.

Hvis "hullet" ikke vises, har du mest sannsynlig monokulært syn, og du må få en øyelege avtale så snart som mulig. Hvis du ser et "hull", men det er forskjøvet fra midten av håndflaten til siden, kan du anta at du har samtidig syn.

En annen måte å sjekke kikkerten i den visuelle oppfatningen din er å ta to blyanter og holde den ene loddrett og den andre horisontalt og prøve å koble dem på et punkt. Med normalt syn vil du kunne gjøre dette uten problemer. Hvis blyantene ikke passer sammen i det hele tatt, er sannsynligvis bare ett øye involvert i den visuelle oppfatningen.

Bare en øyelege kan med absolutt sannsynlighet bestemme om du har binokulær synshemming. Om nødvendig vil han gjennomføre en fargetest og andre studier som er nødvendige for en nøyaktig diagnose..

Korrigerende tester. Vi utvikler oppmerksomhet. Fargelegging etter celler

Trening er et spill av oppmerksomhet, som i utgangspunktet har testen "proof test".

Disse oppmerksomhetsspillene er rettet mot å utvikle evnen til å "se" bokstaver - å konsentrere seg, og som et resultat, å danne seg oppmerksomhet.

I tillegg til å utvikle oppmerksomhetsfunksjonen, kan denne øvelsen hjelpe barnet til å danne ferdigheten til riktig "skanning" av et papirark når du leser eller skriver - fra venstre til høyre, fra topp til bunn.

Chrompeak (sølvtest)

Chrompeak eller kaliumdikromatsulfat er et reagens som brukes for kvalitativ bestemmelse av sølvbelegg og legeringer.

Applikasjon:

  • Det er nødvendig å tørke overflaten av testmetallet med et viskelær eller sandpapir.
  • Deretter påføres en dråpe reagens på det rensede testmetallet, fjern overflødig reagens med en vattpinne etter 3-5 sekunder.
  • Hvis en dråpe forblir gul, men en farget flekk ikke vises på metallet, inneholder ikke legeringen sølv eller prøven er under 500..
  • Hvis fargen endres fra gul til rødbrun til blodrød eller mørkebrun og det dannes et mørkt bunnfall (spesielt merkbar etter tørking / fjerning av dråpen), inneholder legeringen sølv fra prøven over 500. (eller sølvbelegg).

Prøve Farge
600brun rød
780 - 820oransje
875rød
900-999blod rød

Etter farge, med litt erfaring, kan du bestemme prøven med en nøyaktighet på 20 enheter. For en mer nøyaktig bestemmelse av sølv, er det nødvendig å utføre en test på en teststein, ved hjelp av testnåler, samt bruk av andre reagenser.

Kostnaden for Chrompeak er 500 rubler. per 50 gram, inkludert mva *.

* kostnadene inkluderer ikke kostnadene for organisering av levering til kjøpers adresse.

Forklaring av laboratoriemetoder for diagnose av virusinfeksjoner

Generelle egenskaper for virus.

Virus er mikroskopiske ikke-cellulære livsformer som har egenskapen til genetisk parasittisme, inneholder en type nukleinsyre (DNA eller RNA) og multipliserer ved oppløsning. Virus finnes i to kvalitativt forskjellige former: ekstracellulært - virion og intracellulært - virus. Humane og dyrevirus, hovedsakelig med en sfærisk form, kan ha vanlig mangefasettert form. Plantevirus er vanligvis stavformet, og bakterievirus (baktriofager) er oftest sædceller. Størrelser på virus varierer fra 20 til 300 nm.

Avhengig av størrelsen på virusene er delt inn i:

1. Liten - fra 20 til 60-70 nm (picornavirus, arbovirus, reovirus)

2. Middels - 80-150 nm (myxovirus)

3. Stor - 150 nm eller mer (herpesvirus, koppevirus).

Strukturen og den kjemiske sammensetningen av viruset har visse forhold til størrelse. De mest enkle er små virus, de vanskeligste er store. Små virus består bare av nukleinsyre og protein - dette er nukleoproteiner og nukleokapsider. Kapsid består av proteinsubenheter - capsomeres, kompaktpakket, av regelmessige formasjoner på overflaten av nukleotidet i form av en spiral (myxovirus) eller av den kubiske symmetri-typen (entero-, adeno-, herpesvirus). Hvert virus har et visst antall capsomerer (adeno - 252, polio - 60, herpes - 162, etc.). Medium og store virus, i tillegg til nukleokapsidet, har et ytre skall som inneholder proteiner, fett, karbohydrater - suapsapsid. Hele strukturen er virion. Virionen inneholder uorganiske ioner.

Laboratoriemetoder for diagnose av virusinfeksjoner.

Jeg. Express diagnostikk - påvisning av et virus eller dets antigener i testmaterialet:

1. Påvisning av intracellulære inneslutninger (rabies, herpesinfeksjon, varicella og vannkopper) og elementære legemer (variola) ved bruk av spesielle fargningsmetoder og konvensjonell lysmikroskopi.

2. RIF, IFA, RIA, EM, IEM.

3. Påvisning av et nukleinsyrevirus etter PCR-metode.

II. Virologisk metode - valg av virus fra testmaterialet og dets identifikasjon:

1. trinn - virusakkumulering:

a) i celle- og vevskulturer

b) i kylling- eller andembryoer

c) kroppen til et følsomt laboratoriedyr

2. trinn - påvisning (indikasjon) av virus:

a) i cellekultur: for påvisning av cytoplasmatiske og intranukleære inneslutninger, for CPP for viruset, for Salk-fargetesten, for RGA og RGAs.

b) i kyllingembryoet: ved dannelse av plakk på overflaten av ChAO, ved tetting av fostervannet, av RGA.

c) i kroppen til et laboratoriedyr: på kliniske og patologiske forandringer i vev og organer.

3. trinn - virusidentifikasjon:

b) pH, tatt i betraktning følgende: farge Salk test, RTGAs, nøytralisering av CPP eller smittsom aktivitet av viruset.

III. Serologisk metode (serodiagnosis) - påvisning av antistoffer mot virusantigener i pasientens blodserum:

1. RTGA, RSK, IFA, indirekte RIF, RIA.

2. pH med levende laboratorievirusstammer.

Forklaring av laboratoriemetoder for diagnose av virusinfeksjoner.

Jeg. Express diagnostikk - påvisning av et virus eller dets antigener i testmaterialet:

1. Påvisning av intracellulære inneslutninger (rabies, herpesinfeksjon, varicella og vannkopper) og elementære legemer (variola) ved bruk av spesielle fargningsmetoder og konvensjonell lysmikroskopi.

a) Elementære legemer er individuelle store virjoner som måler opptil 200 nm og er synlige med spesielle fargemetoder (i følge Morozov, Romanovsky-Giemsa) under et lysmikroskop: Pashen elementære legemer med kopper i innholdet av vesikler og pustler.

b) I celler som er påvirket av visse virus, kan man observere dannelsen av virale inneslutninger lokalisert i cytoplasma (Babesh-Negri-kropp for rabies, Guarnieri-kropp for kopper), eller i kjernen (for infeksjoner forårsaket av adenovirus, herpesvirus). Arten av ikke alle virale intracellulære inneslutninger er klar. I følge data fra japanske forskere er Babesha Negri-kropper i rabies stedet for produksjon av virjoner, d.v.s. kolonier av elementære partikler. Med herpes er inneslutninger på et tidlig stadium av dannelsen klynger av virjoner. Inneslutninger er farget i henhold til Romanovsky-Giemsa, Turevich, Muromtsev (med rabies).

2. RIF, IFA, RIA, EM, IEM.

a) EM (elektronmikroskopi) - lar deg oppdage patogenet i det kliniske materialet med negativ kontrast. Denne metoden krever en tilstrekkelig høy konsentrasjon av patogenet i materialet (10 4-10 105 partikler / ml).

b) Påvisning av virusantigener:

- RIF (ved bruk av diagnostisk selvlysende sera)

- ELISA (enzymimmunanalyse) er en svært følsom, rask metode, teknisk enkel og rimelig. Det brukes til rask diagnose av hepatitt, luftveisinfeksjoner, gastroenteritt (rotavirusinfeksjoner). Oftest brukes en sandwichversjon av ELISA for å oppdage virusantigener. For sin formulering brukes en flatbunnet polystyrenimmunologisk plate, i bunnen av brønnene hvor antistoffer mot virusantigener er fikset (første antistoffer). En prøve av testmaterialet føres inn i brønnene, inkuberes ved en viss temperatur, deretter vaskes brønnene med spesielle bufferløsninger. Etter vasking, gjør de andre antistoffene konjugert til enzymet (oftest pepperrotperoksidase), inkubert. Etter inkubering blir brønnene igjen vasket grundig og fylt med en substratindikatorblanding - hydrogenperoksyd og tetrametylbenzidin (TMB) eller ortofenylendiamin (RPD) - og inkubert ved romtemperatur på et mørkt sted, hvoretter reaksjonen må stoppes ved å tilsette et stoppreagens (svovel- eller saltsyreoppløsning) syre). Indikatoren (kromogen) i nærvær av aktive oksygenradikaler dannet under gjæringen av hydrogenperoksyd med peroksidase endrer fargen fra fargeløs til blå (TMB) eller solbrun (OFD). Etter å ha stoppet reaksjonen, når du bruker TMB, endres fargen på løsningen til gul, og når du bruker OFD, blir den mørkere. Reaksjonen blir tatt i betraktning i et fotokollorimeter med en vertikal lysretning i en bølgelengde på 450 nm for TMB og 492 nm for RPD mot positive positive og negative prøver.

- RIA (radioimmunoassay-analyse), en type fastfase-immunologisk analyse, når en av de kjente komponentene har en radioaktiv merking. Resultatene telles ved bruk av en teller eller autoradiografi ved bruk av en røntgenfilm. For å påvise AH blandes testmaterialet med et spesifikt serum, og etter en viss tid introduseres en homolog AH merket med en radioaktiv isotop. I dette tilfellet skjer konkurranse mellom binding til spesifikt serum mellom antigenet til testmaterialet og det merkede antigenet. Hvis merket AH forblir fri, anses reaksjonen som positiv siden AH-undersøkelsen har vært bundet til diagnostisk serum. Denne typen immunoassay kalles konkurrerende..

- IEM (immunelektronmikroskopi) - skiller seg fra den vanlige EM ved foreløpig prosessering av testmaterialet med spesifikke antistoffer merket med et metallatom. Slik prosessering fører til det faktum at når du ser på et elektrondiffraksjonsmønster, vil gjenstander av interesse (viruspartikler) vises tydeligere på grunn av den større elektronabsorpsjonskapasiteten til metallet. Dette lar deg identifisere patogenet og samtidig identifisere det..

3. Påvisning av et nukleinsyrevirus etter PCR-metode.

II. Virologisk metode - valg av virus fra testmaterialet og dets identifikasjon:

1. trinn - virusakkumulering:

- akkumulering i celle- og vevskultur

Vevskulturer begynte å bli brukt aktivt siden 50-tallet, da antibiotika kom i praksis (bakterievevvekster stoppet), syntetiske næringsmedier ble utviklet, og påvisning av CPD i virus fungerte som hovedstimuleringen. Siden 1954 begynte de å bruke metoden til enlags vevskulturer. Det er 3 typer vevskulturer:

Primære trypsiniserte kulturer oppnås fra forskjellige vev: hud og muskelvev fra mennesker, kylling, mus, nyrer fra forskjellige embryoer, fra lungene, fra kaninens hornhinne, etc. Vevet knuses, behandles med trypsin, frigjøres fra detritus, standardiserer antall celler suspendert i et næringsmedium med antibiotika, helt i prøverør eller hetteglass. Halvtransplanterbare kulturer er kulturer av diploide celler som tåler 40-50 passasjer utenfor kroppen takket være et dobbelt sett med kromosomer, hvoretter de dør. Transplanterbare kulturer eksisterer utenfor kroppen i veldig lang tid. De er hentet fra normalt vev, fra ondartet, embryonalt. Overførte vevskulturlinjer: Hep-2 (ondartede celler fra en svulst i strupehodet til en person), HeLa (ondartede celler fra en kreft i livmorhalsen), Detroit-6 (ondartede celler fra en hjernesvulst), A-1 (humane amnionceller), MK- 2 - fra ape nyrer - rundt 400 arter totalt. Kulturkulturer krever kulturmedier. Det mest universelle er 199 medium som inneholder 66 komponenter. Eagle installerte 28 viktige komponenter: glutamin, 12 essensielle aminosyrer, 8 komplekse B-vitaminer, 6 uorganiske ioner, karbohydrat og serum. Grunnlaget for alle medier er saltløsninger: Earl, Hanks. pH bør være strengt definert og konstant - 7,0-7,4.

- dyrking av virus i kylling, sjeldnere and, embryoer

Embryoer for virusisolasjon har blitt brukt siden 1930. Fordeler: det er et lukket hulrom fri for mikroflora og virus. Antistoffer dannes ikke i embryoer, som hos forsøksdyr, de er rimelige og billige. Embryoer i forskjellige aldre (fra 5-7 dager til 11-13 dager) og forskjellige infeksjonsmetoder brukes: i amnion, på chorion-allantoic membran - CAO, i chorion-allantoic hulrom, i eggeplommen.

- virusopphopning i kroppen av sensitive laboratoriedyr

Mest brukt er hvite mus i forskjellige aldre, aper (for meslingevirus). Med ansamling av virus hos dyr kan man evaluere stadiene i utviklingen av det kliniske bildet av sykdommen, patomorfologiske og pathhistologiske forandringer i organer og vev..

2. trinn - påvisning (indikasjon) av virus:

a) I vevskultur:

¨ Deteksjon av intracellulære inneslutninger, elementære organer (se Express diagnostikk)

¨ Deteksjon av CPD for forskjellige virus i vevskultur:

Når viruset multipliserer seg i en vevskultur, oppstår forskjellige forandringer som til slutt fører til celledød. Krymping av celler, pyknose av kjerner, deres vridning, dannelse av små focier av disse endringene blir observert under enterovirusinfeksjon, poliovirus gir også veldig rask CPD. Viruset kan formere seg og ikke forårsake merkbare forandringer i cellen, da tyr de til å farge monolaget med hematoxylin-eosin eller en annen histokjemisk metode og studere subtile endringer i kjernene og cytoplasmaet, etc..

¨ RGAds. - hemadsorpsjonsreaksjon:

Denne indikasjonsmetoden brukes bare for virus som inneholder hemagglutininer (GA). Hvis røde blodlegemer tilsettes kulturen til celler infisert med HA-viruset, kan de adsorberes på celler infisert med viruset. Dette fenomenet observeres med flåttbåren encefalitt, influensa, parainfluenza, meslinger, kusma-virus, etc. Reaksjonen registreres ved bruk av lysmikroskopi..

¨ RGA - hemagglutinasjonsreaksjon:

Denne indikasjonsmetoden brukes bare for virus som inneholder hemagglutininer (GA). HA-virus kan forårsake vedheft av røde blodlegemer. I motsetning til hemadsorpsjon, tas en virusholdig væske (VSL) for RGA (kulturmedium, fostervann eller allantoisk væske, etc.), plasseres i brønnen på platen, og en suspensjon av røde blodlegemer (kylling, lam, menneske, etc.) tilsettes. I nærvær av virus med GA i VSL agglutinerer røde blodlegemer, og de danner et bunnfall i form av en paraply (RGA-positiv); i fravær av viruset dannes det et bunnfall fra røde blodlegemer i form av en knapp (RGA-negativ).

¨ Salkfargetest:

Den enkleste metoden for å indikere virus i cellekultur. Essensen er en visuell vurdering av fargen på næringskulturmediet. De fleste kulturmedier for vevskulturer inneholder en indikator - fenolrød. I et nøytralt sterilt miljø er indikatoren rød. I et surt miljø blir fenolrødt gult. Levedyktige celler frigjør sure produkter av stoffskiftet sitt i næringsmediet, noe som får indikatoren til å endre farge fra rød til gul på den tredje dagen. Med akkumulering av viruset i en cellekultur, forstyrrer det cellers funksjon til deres død. Samtidig er det en forsinkelse i fargeendringen på mediet i mer enn 6 dager, noe som gjør at vi kan konkludere med at viruset er til stede i kulturen..

b) I kyllingembryoer:

¨ Plakettdannelse på kor-allantoisk membran

¨ Turbiditet av fostervann.

c) I kroppen til et laboratoriedyr:

¨ Vurdering av kliniske manifestasjoner av infeksjon

¨ Vurdering av patomorfologiske og patohistologiske endringer

3. trinn - virusidentifikasjon:

Viruset identifiseres ved inaktivering av dets eller dets egenskaper med spesifikke antivirale sera. For å gjøre dette inkuberes en virusholdig væske (i RTGA, PH, CSC, ELISA) eller en kultur av infiserte celler (i RIF) med diagnostiske sera, hvoretter:

¨ En suspensjon av røde blodlegemer (kylling, menneske, ram osv.) Er lagt til. Når antistoffer av diagnostisk serum binder seg til hemagglutininer av viruset, oppstår ikke erytrocyttagglutinasjon (et erytrocytsediment i form av en knapp dannes - RTGA er positivt). Hvis serumet ikke er egnet for dette viruset, agglutinerer de røde blodcellene og danner et bunnfall i form av en paraply.

b) LV som tar hensyn til:

¨ fargeeksempel på Salk:

hvis viruset binder seg til antistoffer fra diagnostisk serum, kan det ikke infisere og ødelegge cellekultur, noe som fører til gulning av kulturmediet (pH-positivt). Hvis serumet ikke er egnet for dette viruset, infiserer det cellene i kulturen, de dør, og fargen på kulturmediet forblir rød.

hvis viruset binder seg til antistoffer i diagnostisk serum, utøver det ikke en CPD på cellene i kulturen (pH-positiv). Regnskap utføres mikroskopisk.

¨ nøytralisering av virusets smittsomme aktivitet:

hvis viruset binder seg til antistoffer i diagnostisk serum, forårsaker det ikke sykdom hos et infisert laboratoriedyr (pH-positivt).

hvis viruset binder seg til antistoffer i det diagnostiske serum, forårsaker det ikke adsorpsjon (fiksering) av røde blodlegemer på overflaten av cellekulturen (pH-positiv). Regnskap utføres mikroskopisk.

det er mulig å bruke en sandwichversjon av ELISA (se ekspresdiagnostikk, bare virusholdig væske brukes i stedet for testmaterialet).

kulturen av celler infisert med viruset blir behandlet med et diagnostisk selvlysende serum, og resultatet av reaksjonen blir tatt i betraktning ved bruk av et selvlysende mikroskop. Hvis viruset binder seg til antistoffene i det diagnostiske serum, observeres celleluminescens (RIF er positivt).

III. Serologisk metode (serodiagnosis) - påvisning av antistoffer mot virusantigener i pasientens blodserum:

For serodiagnose av virusinfeksjoner ved bruk av parret serum tatt med et intervall på 10-14 dager. Minst fire ganger økning i AT-titer er diagnostisk signifikant.

1. RTGA, RSK, ELISA, indirekte RIF (med antiglobulin selvlysende serum), RIA med virusantigener eller inaktiverte viruspartikler.

2. pH med levende laboratoriestammer av viruset, tatt i betraktning følgende: en farge-Salk-test, RTGA-er, nøytralisering av CPP eller smittsom aktivitet av viruset.

Gjennomføring av en farget lakrimal nesetest

Farge lakrimal nesetest Alternative navn: fargetest Vesta, fluorosceintest, nesetest.

Farge lakrimal-nesetest er en av forskningsmetodene i oftalmologi, som består i å vurdere den aktive tettheten til banene som tårer strømmer fra øyet inn i nesehulen. I løpet av studien måler legen tiden det tar før fargestoffet blir innpodet i konjunktivalhulen for å komme fra konjunktivalhulen inn i nesepassasjen. Hensikten med denne teknikken er å gi en integrerende vurdering av den aktive konduktiviteten til tårevæsken langs hele tårekanalens lengde. Denne forskningsmetoden er den mest populære metoden for å diagnostisere sykdommer i tårekanalene på grunn av enkelheten i implementeringen og det fullstendige fraværet av bivirkninger og komplikasjoner. Forberedelse til testen. Ingen spesiell forberedelse er nødvendig. Testing er mulig når som helst på dagen..

Hvordan utføres en farget lacrimal-nasal test? Pasienten sitter, en dråpe fargestoff (1% natriumfluorosceinløsning eller 3% kollargoloppløsning) pipetteres inn i bindehulen. Etter det ber legen pasienten vippe hodet frem og blinke litt. Etter 3 og 5 minutter blir pasienten bedt om å blåse nesen i et vått håndkle av hvert nesebor hver for seg. Om nødvendig setter legen inn en knappesonde under nedre nese-concha, tett pakket med fuktig bomullsull eller bandasje. Ved tilstedeværelse av fargestoff på et serviett eller bandasje, en tolkning av resultatene.

Tolkning av resultater

Med normal tetthet av tårekanalene, kommer fargestoffet inn i nesehulen senest 5 minutter senere. I dette tilfellet anses prøven som positiv. Farging av en serviett eller turunda fra 6 til 20 minutter etter innføring av fargestoffet anses som en forsinket prøve. Dette faktum snakker om stenose til en av avdelingene i lacrimalkanalene. Hvis fargestoffet vises senere enn etter 20 minutter eller ikke vises i det hele tatt, anses prøven som negativ. Dette kan bemerkes med fullstendig hindring av lacrimal tubuli eller nasolacrimal kanal..

indikasjoner

De viktigste indikasjonene for å utføre en farget lacrimal nesetest er lacrimation og lacrimation. Denne testen kan også utføres som en del av en omfattende undersøkelse av synsorganet under forebyggende undersøkelser..

Kontraindikasjoner for testen

Den eneste kontraindikasjonen for testen er en individuell intoleranse mot fargestoffet (kollargol eller fluorescein). Gitt at disse stoffene ikke har kryssallergi, i tilfelle en allergisk reaksjon på ett medikament, kan du teste med et annet.

Komplikasjoner Ingen komplikasjoner notert.

tilleggsinformasjon

Denne testen er svært spesifikk, men i noen tilfeller er det mulig å oppnå falske resultater. Dette skjer i følgende tilfeller: med alvorlig betennelse i neseslimhinnen (rhinitt) eller når du klemmer fargestoffet på huden med blefarospasme (ufrivillig sammentrekning av øyets sirkulære muskel). I disse tilfellene anbefales det å utsette prosedyren. Lakrimal nesetest i farger er den mest tilgjengelige metoden for å studere tårekanalens aktive patency. Den eneste mer nøyaktige alternative metoden er scintigraphy av tårekanalene, som er basert på å overvåke passasjen gjennom banene til et radiofarmasøytisk som inneholder isotopen technetium-99 gjennom et gammakamera. Denne studien lar oss vurdere graden av stenose i tubuli og kanal. På grunn av kompleksiteten i denne studien, er den imidlertid ikke mye brukt i klinisk praksis. Basert på resultatene fra en farget nasal lakrimal test blir spørsmålet om behovet for andre undersøkelsesmetoder oftest løst: diagnostisk vask og sondering av tårekanalene, røntgen av tårekanalene. En omfattende undersøkelse lar deg stille riktig diagnose og bestemme taktikken for behandlingen.